El termociclador es un equipo que permite la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de forma eficiente y rápida; mediante la realización automática y cíclica de los cambios de temperatura que se requieren para la amplificación de una cadena de ácido desoxirribonucleico (ADN); a partir de una enzima termoestable.

Los termocicladores se emplean para amplificaciones cualitativas o para cuantificar la cantidad de ADN amplificado. Los resultados de estas técnicas de amplificación de ADN tienen un gran impacto en nuestra sociedad; sobre todo en este periodo de pandemia donde las mismas se han vuelto una de las principales pruebas diagnosticas, razón por lo que se debe asegurar que los termocicladores sean precisos; exactos y uniformes, con el fin de obtener resultados confiables.

¿Qué es la reacción en cadena de la polimerasa o PCR?

La reacción en cadena de la polimerasa, llamada PCR de forma abreviada por sus siglas en inglés (polymerase chain reaction), es una técnica que permite la amplificación exponencial de un fragmento de ADN de interés. Es decir, a partir de un bajo número de copias de ese fragmento, tras la reacción de PCR, se obtienen millones de copias que ya son fácilmente detectables en el laboratorio. La PCR fue inventada por Kary Mullis en 1986 y le valió el premio Nobel en 1993.

¿Qué es la PCR en tiempo real?

La PCR en tiempo real es una modalidad del PCR de punto final, donde la acumulación de ADN amplificado es detectado y cuantificado a medida que la reacción avanza, es decir: “En tiempo real” esto se logra incorporando una molécula fluorescente que se asocia al ADN amplificado, donde el incremento de esta fluorescencia es la proporcional al incremento de la cantidad de moléculas de ADN amplificadas en la reacción.

Los protocolos de la PCR en tiempo real pueden diseñarse para obtener resultados cuantitativos así como demostrar la presencia o ausencia de un fragmento de ADN o ARN o resultados cuantitativos calculando el número de copias de ADN, que al compararse con una curva estándar, establece la cantidad de microorganismos presentes en una muestra determinada o bien determinar el número de moléculas de un ARN para designar la expresión de este por ejemplo.

La PCR en tiempo real es una técnica que combina la amplificación y la detección en un mismo paso, al correlacionar el producto de la PCR de cada uno de los ciclos con una señal de intensidad de fluorescencia. Están compuestos por un termociclador acoplado a un sistema óptico, que monitoriza la señal de los fluoróforos usados para detectar el producto amplificado. Debido a que la fluorescencia de éstos aumenta conforme el producto se amplifica, se combinan los procesos de amplificación y detección en una sola etapa.

Esta técnica posee características importantes como son alta especificidad, amplio rango de detección y rapidez en la visualización del producto. Los sistemas de PCR en tiempo real incluyen un termociclador y una unidad capaz de detectar señales fluorescentes para monitorizar el progreso de la reacción de amplificación, así como un software para el análisis de los datos. Los fluoróforos utilizados para seguir la amplificación del ADN durante la PCR en tiempo real pueden ser con afinidad por el ADN (SYBR Green) o sondas específicas para fragmentos del ADN (sondas Taqman).

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