¿Cuáles son las Técnicas Microscópicas para determinar el virus de la Influenza A?

octubre 14, 2022by Kalstein
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El influenzavirus A es un género de virus perteneciente a la familia Orthomyxoviridae. Es el virus causante de la enfermedad gripe A, ésta es por lo general una gripe más fuerte y virulenta que las otras variantes antigénicas menores. El virus de la influenza A, por lo general, causa la enfermedad únicamente en aves, sin embargo, puede infectar varias especies de mamíferos, entre las cuales está el ser humano. Los subtipos conocidos de este virus son endémicos de aves, por lo que se le considera como una enfermedad de aves, aún así, debido a los contagios que han ocurrido en humanos en los últimos años, sobre todo en países de Asía, es un virus al que se le vigila estrechamente. 

Son varias las pruebas que hay disponibles para detectar el virus de la influenza A en muestras respiratorias, las usadas comúnmente son las pruebas de diagnóstico rápido que se encargan de detectar los antígenos, que son quienes estimulan la respuesta inmunitaria. Por supuesto, algunos de estos ensayos necesitan del uso de microscopía electrónica o microscopía de inmunofluorescencia para la visualización del virus. 

Microscopio de inmunofluorescencia en detección de virus de influenza A

Los test de inmunofluorescencia, son un tipo de prueba en la que se busca la detección de antígenos utilizando microscopios fluorescencia para obtener resultados, estas pruebas por lo general arrojan resultados en un periodo de entre 2 a 4 horas y tienen buena sensibilidad y especificidad. Los ensayos utilizados con el microscopios de fluorescencia son la tinción fluorescentes de anticuerpos directos (DFA) y la tinción fluorescentes de anticuerpos indirectos (IFA), ambos utilizados en la detección de antígenos de influenza A. A continuación se explican ambas técnicas: 

  • DFA: se basa en el tratamiento de células epiteliales respiratorias con anticuerpos específicos conjugados con tintes fluorescentes, para luego aplicar un anticuerpo monoclonal. Posteriormente la muestra debe visualizarse en el microscopio de fluorescencia. Es una prueba diagnóstica muy útil porque genera resultados rápidos y precisos. 
  • Técnica IFA: a través de esta técnica se pueden detectar antígenos de microorganismos o virus a los que se han fijado anticuerpos teñidos con fluoresceína. La muestra se examina a través del microscopio de fluorescencia.

Los microscopios de fluorescencia son un tipo de microscopio convencional que se caracteriza porque se le añade un adaptador de fluorescencia para poder visualizar muestras con contraste de fluorescencia. El microscopio de fluorescencia utiliza una intensidad de luz mayor a la luz visible usada por los microscopios convencionales, de esta forma la luz excita a las muestras marcadas con fluorescencia. 

Microscopía electrónica en la detección de virus de influenza A

Por otro lado, la microscopía electrónica se utiliza con la técnica de aislamiento viral. Esta técnica es muy utilizada en la detección de infecciones virales, por ser altamente sensible. Para la detección del virus de la influenza, esta es una de las mejores opciones. El cultivo viral se basa en el cultivo del virus en células o huevos embrionados. Posteriormente la muestra es observada bajo el microscopio electrónico, ya que este tiene mayor aumentó. 

El microscopio electrónico, es un equipo de laboratorio de gran tamaño el cual utiliza un haz de electrones para la visualización de las imágenes, en lugar de luz visible, ya que con esta última no se pueden observar agentes tan pequeños como los virus. Está compuesto básicamente por una columna de 1.5 metros, un sistema de alto vacío y un generador de alto voltaje, para producir el haz de electrones que impactará la muestra. Con los microscopios electrónicos es posible tener un aumento de cerca de 1.000.000x, por lo que es más sencillo ver virus, cromosomas, moléculas de ADN o átomos. 

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